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實驗室離心機方法選擇
點擊次數:703 更新時間:2023-11-21

實驗室離心機常見的有差速離心法、速率區帶離心機和等密度區離心法,它們在不同的實驗場景下有不同的應用。


1. 差速離心法:差速離心法是一種常見的離心方法,通過調整離心機轉速,使樣品在離心管中形成不同的沉降速度,從而實現分離。這種方法適用于分離不同密度的物質,如細胞、蛋白質、DNA等。常見的差速離心機有常規離心機和超速離心機。

差速離心法.png


操作過程中一般是在第一級離心后將上清液與沉淀分開,然后將上清液再在更高轉速條件下離心,分離出第二部分沉淀,如此往復逐級加高轉速,逐級分離出所需要的物質。差速離心的分辨率不高,沉淀系數在同一個數量級內的各種粒子不容易分開,常用于生化樣品的粗制品提取。


2. 速率區帶離心機:速率區帶離心機是一種特殊的離心機,通過調整離心機轉速和離心管中的密度梯度,使樣品在離心過程中形成不同的速率區帶,從而實現分離。這種方法適用于分離復雜的混合物,如蛋白質、核酸等。速率區帶離心機可以實現高分辨率的分離效果。

離心帶法.png


比如要從靜脈血中分離出單個核細胞,前一種分離液Ficoll將血液中的所有單個核細胞(淋巴細胞和單核細胞)分為一個層,同時提取。而Percoll分離液將血液中淋巴細胞和單核細胞分為兩個梯度層,分別提取。梯度液在離心過程中以及離心完畢后取樣時,起著支持介質和穩定劑的作用,避免因機械振動而引起已分層的粒子重懸。


采用速率區帶離心法時,需要嚴格控制離心時間,既要有足夠的時間使各種粒子在介質梯度液中形成區帶,又要避免任一待分離粒子形成沉淀狀態。


3. 等密度區離心法:等密度區離心法是一種特殊的離心方法,通過調整離心機轉速和離心管中的密度梯度,使樣品在離心過程中形成不同的密度區帶,從而實現分離。這種方法適用于分離密度相近的物質,如細胞亞細胞器、病毒等。等密度區離心法可以實現高純度的分離效果。


等密度區帶離心.png


等密度區帶離心的離心效果取決于顆粒的浮力密度差,密度差越大,分離效果越好,與顆粒的大小和形狀無關,但后兩者決定著達到平衡的速率、時間和區帶的寬度。


等密度區帶離心方法的特點:

(1)與樣品粒子的密度有關;

(2)與樣品粒子的大小和其他參數無關 ;

(3)轉速、溫度不變,則延長離心時間也不能改變這些粒子的成帶位置。




在選擇離心方法時,需要根據實驗目的、樣品特性和離心機設備的性能來確定最合適的方法。同時,操作時要注意遵循離心機的使用說明和實驗室的安全操作規程,確保實驗的準確性和安全性。


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